簡介：同濟醫科大學碩士學位論文調寧蛋白的功能位點及其在慢性缺氧時的變化的研究姓名唐艷霞申請學位級別碩士專業病理生理學指導教師王迪潯唐大椿19990401竺簍苧竺竺』苧4、連續多代缺氧培養的肺動脈平滑肌細胞第2、4、6代CA|PONIN含量比常氧組分別增加13倍，2倍，25倍。結果提示1、THR184可能是CAP磷酸化作用的一個位點，與血管收縮反應有關；2、長期缺氧可致CALPONIN水平升高，這可能是缺氧導致肺動脈對缺氧的收縮反應減弱的機制之一。7L，、。2

簡介：中國人民解放軍軍事醫學科學院博士學位論文新的紅細胞分化相關基因的功能研究姓名王敦成申請學位級別博士專業分子免疫學指導教師沈倍奮200161博士學位論文英文縮略詞表IL一6RHUMANINTERLCUIN6RECEPTOR白介素6受體INOSHUMANINDUCIBLENITRICOXIDESYNTHASE誘導型氮氧化物合酶KBKILOBASES千堿基LCRLOCUSCONTROLREGION基因座位控制區MCSFIFAMNMACTOPBAGECOLONYSTIMUIA曲GFACTOR巨噬細艚集落生成因子MCSFHUMANMACROPHAGECOLONYSTIMULATINGFACTOR巨噬細胞集落生成因子MCSFRHUMANMACROPHAGECOLONYSTIMULATINGFACTOR人巨噬細胞集落生成因子受體RECEPTORMHCCLASSMAJORHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEXCLASS1人主要組織相容性復合物I類LMTNMUHVTISSUENORTHERN多組織NONHCMNCBINATIONALCENTERFORBIOTECHNOLOGYINFORMATION美國家生物技術信息中心NFE2NULEARFACTORERYTHROID2紅系核因子2ODOPTICALDENSITY光密度P50HUMANNFKAPPABETA核因子X的B鏈PAGEPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰氨凝膠電泳PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈式反應PDGFAHUMANPLATELETDERIVEDGROWTHFACTORA血小板【源性長因子APDGFEHUMANPTATELETDARIVEDGROWTHFACTOR0婭小板【源】生長因子BPEGPOLYETHYLENEGLYCOL聚乙二醇PKCPROTEINKINASCC蛋白激酶CRACERAPIDAMPLIFICATIONOFEDNAENDSCDNA末端快速擴增RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION反轉錄PCRSCFSTEMCELLFACTOR千細胞園子SCLHUMANSTEMCELTLEUKEMIAGENE干細胞白血病基因SDSSODIUMDODECYLSULFATET二烷基磺酸鈉SSCSTANDARDSALINECITRATE標準檸檬酸鹽緩沖液STATSIGNALTRANSDUCERANDACTIVATOROFTRANSCRIPTION信號轉導子與轉錄激活子TGFAHUMANTUMORNECROSISFACTORRECEPTOR人腫瘤壞死因子ATGFAHUMANTRANSFORMINGGROWTHFACTORN轉化生長因子ⅡTGPB1HUMANTRANSFORMINGGROWTHFACTOR8I轉化生長因子B1TGFB2HUMANTRANSFORMINGGROWTHFACTOR目2轉化生眭園子B2TNFRIHUMANTUMORNECROSISFACTORRECEPTORT55KD人腫瘤壞死因子受體ITNFRIIHUMANTUMORNECROSISFACTORRECEPTOR人腫瘤壞死因子受體III75KDATNFBHUMANTUMORNECROSISFACTORBB2MHUMAN82MIEROGLOBULIN人腫瘤壞死因子B02微球蛋白

簡介：目的建立三色法流式細胞術檢測T淋巴細胞內細胞因子的方法；探討核因子ΚB在支氣管哮喘患者T淋巴細胞表達TH1TH2類細胞因子Γ干擾素ΓIFN白細胞介素4IL4的調控信號傳導中的作用。方法1正常人外周血在12肉豆蔻酰13乙酸佛波酯PMA、IONOMYCIN和MONENSIN存在的條件下在體外短期培養，進行細胞膜表面抗原和細胞內細胞因子染色，用流式細胞儀對淋巴細胞內細胞因子進行測定，并對分析方法中細胞膜表面抗體的選擇和不同刺激時間對測定結果的影響等進行了探討。2選取輕中度急性發作期哮喘患者20例，正常對照20例。正常對照組取外周血加入PMA培養。哮喘患者取外周血并分成2組培養。第一組加入PMA第二組同時加入PMA和核因子ΚB抑制劑二硫代氨基甲醇吡咯烷PDTC。將培養的外周血用三色法流式細胞術檢測T淋巴細胞亞群。結果1選用不同的單抗和刺激劑的刺激時間不同，對實驗結果有較大影響。2加入PMA培養的哮喘患者T淋巴細胞TH1，TH2，TH1TH2與正常對照組比較差異有顯著性，且與同時加入PMA和PDTC培養的哮喘患者外周血T淋巴細胞組比較也有顯著性。哮喘患者TH1細胞、TH1TH2較正常人明顯降低，而哮喘患者的TH2細胞較正常人明顯升高。同時加入PMA和PDTC培養的哮喘患者外周血T淋巴細胞組TH1細胞、TH1TH2較哮喘患者明顯升高，TH2細胞明顯降低。結論1流式細胞術是單細胞水平檢測細胞內細胞因子的較為理想的方法；2細胞內細胞因子檢測的影響因素較多，分析時需選擇適當的測定條件；3T淋巴細胞活化后使淋巴細胞亞群改變可能是通過核因子ΚB來傳導的。T淋巴細胞核因子ΚB信號傳導途徑的激活可能是哮喘的發病機制之一。

簡介：中山大學碩士學位論文華支睪吸蟲CSSCCRO基因的發現及其功能初步研究姓名趙玉利申請學位級別碩士專業病原生物學指導教師余新炳20060401趙玉利碩士學位論文中文摘要盡管有充分的證據表明，華支睪吸蟲的感染是引發肝膽管癌的一個重要因素，但是至今仍缺乏明確的分子水平的實驗證據；另一方面，華支睪吸蟲是否存在與人鱗狀上皮癌腫瘤相關基因相類似的基因，是否也具有與其相類似的作用都值得進一步探討。研究目的從華支睪吸蟲成蟲CDNA文庫中篩選出與人鱗狀上皮癌腫瘤相關基因相類似的基因，探討其與肝膽管癌發生、發展的關系，為華支睪吸蟲感染引起肝膽管腫瘤提供分子生物學依據，同時豐富華支睪吸蟲基因組學和功能基因組學研究。研究方法L華支睪吸蟲CSSCCRO基因的發現和生物信息學分析從華支睪吸蟲成蟲CDNA文庫測序后UNIGENE歸并、拼接，獲得與人鱗狀上皮癌相關腫瘤基因相類似的基因，暫命名為CSSCCRO。測序、分析是否為全長基因，然后利用生物信息學分析軟件對此基因的CDNA序列進行結構、性質和功能分析，包括核酸水平和氨基酸水平的同源性分析、以及推導的DSCCRO蛋白的理化性質及空間結構分析。2華支睪吸蟲CSSCCRO基因克隆、表達和WESTERNBLOTTING鑒定21華支睪吸蟲成蟲CSSCCRO基因的擴增、克隆根據目的基因的ORF和原核表達質粒PET30A設計引物，PCR擴增CSSCCRO基因的CDNA全長編碼區。限制性內切酶XHOI、ECORV雙酶切空質粒PET30A矛DPCR產物，T4連接酶連接。用PCR、酶切及測序鑒定。22華支睪吸蟲成蟲CSSCCRO基因的表達和純化將PET30A一CSSCCRO重組質粒轉化的大腸桿菌BL21中表達，IPTG誘導后超聲裂解破碎，最后用NINTAAGAROSE蛋白純化柱純化目的蛋白，核酸蛋白定量分析儀DU530BECKMANNU濃度。23華支睪吸蟲成蟲CSSCCRO蛋白的WESTERNBLOTTING鑒定

簡介：●●●分類號聊弓密級單位代碼10422學號沙口7／羅／壙∥1|I●T，厶蒙夕；孥碩士學位論文SHANDONGUNIVERSITYMASTER’STHESIS論文題目U形病喜讎縫爰們孑耕挑√舷膊動能絲千慟一6叫‘M溉朔腑曳漱鋤訓糾‘作者姓名專業導師合作導師艘上U鞋硪O／O年D歲月汐日么I覷L多●●●原創性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解山東大學有關保留、使用學位論文的規定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權山東大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。保密論文在解密后應遵守此規定觸新虢駐巡虛差上母嘲

簡介：南京師范大學碩士學位論文抗FSH自身抗體對雄性生殖系統的影響及其作用機制的初步研究姓名徐會茹申請學位級別碩士專業發育生物學指導教師姚兵20070525南京師范大學碩士論文抗FSH自身抗體作用機制的初步研究THEEFFECTOFANTISERAAGAINSTFSHONMALEABSTRACTREPRODUCTIVESYSTEMTOSTUDYWHETHERANTISERAAGAINSTFSHWASEXISTEDINTHESERUMOFINFERTILITYPATIENTS，WEESTABLISHEDTHEELISAMETHODFORTHEDETECTIONOFANTISERAAGAINSTFSHTHESERUMANTISERAAGAINSTFSHINSOMEINFERTILEORFERTILEMENWASDETECTEDTHERESULTINDICATEDTHATTHEINCIDENCEOFTHEANTISERAAGAINSTFSHINTHEPATIENTSWITHOLIGOSPERMIAANDAZOOSPERMIAWASSIGNIFICANTLYHIGHERTHANTHATINFERTILITYMENWEPRESUMEDTHATTHEANTISERAAGAINSTFSHMIGHTAFFECTTHESPERMATOGENESISOFTHEMALETESTISTOFURTHERRESEARCHTHEEFFECTOFANTISERAAGAINSTFSHONMALESPERMATOGENESIS，WEESTABLISHEDTHERATMODELOFANTISERAAGAINSTFSHWEHADFOUNDTHATINMODELRATS，THENUMBEROFSPERMATOGENICCELLSINSEMINIFEROUSTUBULEANDTHESPERMCOUNTSINTUBULARLUMINADECREASED，WHENCOMPAREDWITHCONTROLGROUPITCONFIRMEDOURPREVIOUSPRESUMPTIONTHATTHEANTISERAAGAINSTFSHMIGHTAFFECTTHESPERMATOGENESISOFTHEMALETESTISBASEDONTHEABOVEEXPERIMENTALRESULTS，THESERUMHORMONESANDTHEAPOPTOSISOFTESTICULARCELLSWEREDETECTEDTOEXPLORETHEACTIONMECHANISMOFANTISERAAGAINSTFSHTHEEXPERIMENTALRESULTSSHOWEDTHATTHESERUMFSHLEVELINMODELRATIMMUNIZEDWITHPOLYPEPTIDEFOR77U

簡介：本論文分為三個部分對ARHT2、RHEBL1、STK40和LDHAL基因的克隆及其功能進行了研究。第一部分利用EST策略克隆了新的人和小鼠小G蛋白基因ARHT2、RHEBL1和假激酶基因STK40，在一至三章進行了論述。第一章中我們用EST策略獲得了一個新的小GTP酶ARHT2基因，還用同源克隆策略獲得了其它物種的ARHT2基因。第二章中，我們用EST策略獲得了另外一個新的小GTP酶基因RHEBL1，它是MT通路的關鍵調節蛋白RHEB的同源基因。第三章中我們用EST策略拼接并克隆了人和小鼠的假激酶樣基因STK0，并對其進行了分析研究。第二部分是用同源克隆策略獲得在睪丸中特異表達的新型乳酸脫氫酶基因LDHAL。在這部分的研究工作中，用LDHA基因作為信息探針，結合EST策略，我們克隆了一個在睪丸特異表達的L乳酸脫氫酶基因LDHAL。并經過研究發現，LDHAL可能參與精子發生過程中的能量代謝。本文第一部分克隆了兩個GTP酶基因和一個絲氨酸蘇氨酸激酶樣基因，發現ARHT2基因在小鼠睪丸中可能參與精子的成熟。而RHEBL1基因可以通過與BRAF的互作影響下游基因的轉錄，還可以激活NFB通路，并為TSC2找到了一個候選的靶分子；STK40基因可以激活NFB通路。第二部分獲得的睪丸特異表達的乳酸脫氫酶LDHAL基因，可能參與精子發生過程中的能量代謝，為人類避孕研究和鼠害的防治提供了新的分子靶標。第三部分為綜述，論述了RHEB基因功能的研究進展。

簡介：華中科技大學博士學位論文SNAPIN對神經分泌的調節作用姓名吳政星申請學位級別博士專業生物物理指導教師徐濤周專20050429II實驗采用同源重組方法產生失效突變，使SNAPIN基因不表達－即SNAPIN基因敲除，采用生物化學方法研究SNAPIN蛋白的缺失對與分泌相關的必需蛋白質和調節蛋白的表達水平、SNARE蛋白的聚合反應和SYNAPTOTAGMIN與SNARE復合體相互作用的影響。生物化學實驗結果顯示SNAPIN缺失不影響已知參與突觸囊泡胞吐活動的必需蛋白質和調節蛋白的表達，表明SNAPIN基因敲除不會引起為神經元軸突末梢遞質釋放所必須的蛋白質的代償性表達變化。此外，SNAPIN缺失也不影響SNARE蛋白的聚合反應。與野生型同胎小鼠相比較，基因敲除小鼠腦勻漿中的SYNAPTOTAGMIN1與SNAP25的結合顯著降低343FROM11LITTERMATESP001。實驗使用高時間分辨率的膜電容測量法測量囊泡與細胞膜的融合并同時使用微碳纖電化學檢測法檢測兒茶酚胺的釋放，研究SNAPIN對嗜鉻細胞分泌動力學和鈣離子依賴性的影響；用高強度的短暫紫外光來裂解NPEGTA使細胞胞漿的游離鈣離子濃度瞬時升高到某一較高濃度并維持一段時間，快速刺激細胞分泌。實驗結果表明SNAPIN基因敲除小鼠嗜鉻細胞胞吐簇發相的幅度顯著減少而持續相沒有變化，野生型SNAPIN在基因敲除細胞中的過表達可以完全消除SNAPIN基因的敲除對胞吐的抑制作用，使胞吐簇發相恢復到野生型細胞的水平。電子顯微鏡觀察和分析顯示SNAPIN基因敲除對嗜鉻細胞囊泡的數目和空間分布沒有影響，即囊泡的錨定不受影響。RAMP實驗結果顯示SNAPIN的缺失不改變囊泡胞吐的鈣離子敏感性和協同作用，即胞吐的鈣依賴性沒有改變。因此，SNAPIN基因敲除小鼠的生物化學和電生理研究表明SNAPIN參與對囊泡胞吐活動的調節，其分子機制可能是促進SYNAPTOTAGMIN與SNARE復合體的相互作用，穩定SYNAPTOTAGMINSNARE復合物，降低激活過程的逆反應去激活速率，從而穩定激活囊泡，維持可釋放囊泡庫的正常大小。簡要地介紹了細胞分泌研究領域常用的幾種先進生物物理技術和手段；描述了全內反射熒光顯微鏡的構建和消散場的校準。用全內反射熒光顯微成像技術觀察了PC12細胞單個囊泡的錨定、去錨定和與細胞膜的融合，為囊泡錨定是可逆性過程的學說提供了直接的觀察證據。關鍵詞關鍵詞SNAPIN胞吐嗜鉻細胞囊泡激活膜電容測量電化學檢測SYNAPTOTAGMINSNAP25

簡介：南京醫科大學碩士學位論文肌動蛋白磷酸化及其作用的研究姓名李迎春申請學位級別碩士專業生理學指導教師顧洛戈應濱20050701南京醫科人學頂學位論文化的肌動蛋白存在于細胞骨架部分，而不存在于細胞漿內。本研究結果提示，在ATP缺乏時兔腎臟近端小管上皮細胞內肌動蛋白的磷酸化與肌動蛋白的捕獲密切相關。關鍵詞肌動蛋白細胞骨架磷酸化ATP缺乏二維電泳免疫印跡法

簡介：第二軍醫大學博士學位論文人單核細胞（THP1）CDNA表達文庫的構建及趨化因子CXCL14（MIP2ΓBRAK）受體的尋找姓名劉斌申請學位級別博士專業免疫學指導教師曹雪濤20050501笙三呈墮盔堂墮主笙奎絲墮型重縮寫APBLASTCLLAPS縮略詞表英文名稱ALKALINEPHOSPHATASEBASICLOCALALIGNMENTSEARCHTOOL3一【3CHOLAMIDOPROPYUDIMETHYLAMMONO1PMPANESULFONATE中文名稱堿性磷酸酶基本局部對齊搜索工具3【3膽胺丙基二甲基氨】1丙烷磺酸酯CODEHOPSCONSENSUSDEGENERATE共同簡并雜合寡核苷酸引物HYBRIDOLIGONUCLEOTIDEPRIMERSDTTEGIAEST同LORFGPCRGSTIPLRGMGCNCBIPNPPREFSEQRTPCRDITHIOTHREITOL硫蘇糖醇ETHYLENEGLYCOLBISBAMINOETHYL7醇雙乙胺醚NN’四乙酸ETHERN，N，N’，N’TETRAACETICACIDEXPRESSIONSEQUENCETAG表達序列標簽FULLLENGTHOPENREADINGFRAME全長開放讀框GPROTEINCOUPLEDRECEPTORG蛋白耦聯受體GLUTATHIONESTRANSFERASE谷胱甘肽S轉移酶ISOPROPYLTHLOBDGALACTOSIDE異丙基BD硫代半乳糖苷MAMMALIANGENECOLLECTION哺乳動物基因集合NATIONALCENTERFORBIOTECHNOLOGYINFORMATIONPNITROPHYLPHOSPHATE，DISODIUMSALT，HEXAHYDRATE美國國家生物技術信息中心對硝基苯磷酸二鈉REFERENCESEQUENCE參照序列REVERSETRANSCRIPTASEPOLYMERASE逆轉錄酶一多聚酶鏈式反應CHAINREACTION

簡介：浙江大學碩士學位論文遺傳毒物苯并芘/非遺傳毒物誘導ΓH2AX焦點形成能力的研究姓名周春仙申請學位級別碩士專業病理學與病理生理學指導教師楊軍20060501浙江大學碩士學位論文遺傳毒物苯并芘／非遺傳毒物誘導丫H2AX焦點形成能力的研究浙江大學醫學院2004級碩士研究生導師病理擘與病理生理學周春仙揚軍教授中文摘要日前，與環境致癌物相關的腫瘤發病率呈上升趨勢，準確地檢測環境中的致癌物是預防和治療癌癥的重要任務之一。致癌物包括遺傳毒物和非遺傳毒物。遺傳毒物通過損傷遺傳物質DNA而起細胞毒作用。非遺傳毒物包括一些細胞毒素、免疫抑制劑等等，它們不通過與DNA作用而促進癌癥的發生。迄今所知的大多數致癌物都是遺傳毒物，它們對DNA的損傷包括DNA單鏈斷裂DNASINGLESTRANDBREAL【S，SSBS、雙鏈斷裂DNADOUBLES仃ANDB懈LKS，DSBS、DNA加合物形成、鏈內，鏈間交聯及堿基置換等等，其中DSBS被認為是最嚴重的損傷方式之一。因此，如何準確對DSBS的檢測有助于癌癥的預防和治療。近年來研究發現，DSBS出現后，組蛋白家族成員H2AXC．端139位絲氨酸殘基SCR可被磷脂酰肌醇3一激酶PHOSPHATIDYL血OSITOL3城ILASE，P13K樣家族成員磷酸化形成YH2AXGA咖AMAX。TMAX可以募集其它DNA修復蛋白到損傷位點，形成焦點FOCI結構，共同完成DNA修復過程。在電離輻射R后，在損傷位點快速形成YMAX焦點，并且焦點的數量與LR造成的DSBS的數量存在一一對應關系，表明證王2AX焦點的形成可用于檢測R誘導的DSBS。另外發現，其它間接導致DSBS的遺傳毒物如順鉑、喜樹堿也誘導他AX焦點的形成。因此，直接或者間接導致的DSBS的產生都能誘導Y磁AX2

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簡介：研究背景與意義二十世紀九十年代人類基因組計劃HUMANGENOMEPROJEETHGP的提出及完成極大地促進和帶動了一系列生物基因組計劃的蓬勃發展。截止到目前為止GENBANK已經登錄了數千種生物的基因組序列并且還有數百種生物的基因組測序正在進行之中。在登錄的基因組數據中有的完成了初步注釋有的僅僅是完成了測序工作。盡管測序工作進展神速但基因功能研究明顯滯后這給科研工作者提出了新的課題。因此基因功能研究成為了后基因組學或功能基因組學時代的艱巨任務之一。本室在前期工作中分離鑒定了3株銅綠假單胞菌噬菌體分別命名為PAP1、PAP2和PAP3PSEUDOMONASAERUGINOSAPHAGE。目前溶源性噬菌體PAP2和PAP3全基因組測序及基因初步注釋工作已經完成并提交到GENBANK。裂解性噬菌體PAP1基因組也已經完成了部分測序。根據分析這三種噬菌體所預測的基因中大多數為功能未知基因。因而展開對這些基因的分析及功能驗證成為我們面臨的重要任務。在功能基因研究中我們首先把目標集中在與噬菌體裂解細菌有關的基因上。這是因為噬菌體是以細菌為宿主的病毒噬菌體在感染宿主菌時必須穿過細菌的細胞壁肽聚糖層或者將其核酸注入到宿主菌體內進行復制。噬菌體在完成復制、組裝后又必須破壞宿主肽聚糖層釋放子代噬菌體進而感染新的細菌。因此噬菌體完成其繁殖必須“一進一出”兩次穿越宿主菌的細胞壁屏障。與單鏈DNARNA噬菌體不同的是雙鏈DNA噬菌體感染宿主的結果往往最終殺死宿主菌。因此噬菌體在感染過程中必然產生一種能夠破壞宿主細胞壁肽聚糖層的相關酶類。而細胞壁是細菌賴以生存的基礎能夠破壞細胞壁的酶類也就有可能成為潛在的抗感染藥物。根據文獻報道控制雙鏈DNA噬菌體進出宿主細胞的物質是一種由噬菌體編碼的蛋白稱作內溶素或者肽聚糖解聚酶ENDOLYSIN或者LYSIN簡寫為ELYS。內溶素作為一種酶蛋白可以破壞噬菌體宿主菌的細胞壁肽聚糖。因而內溶素有可能成為某些致病細菌特別是耐藥性致病菌的潛在的抗感染藥物。另外大部分噬菌體的內溶素由于缺少信號肽不能夠穿透宿主細胞膜通常需要噬菌體編碼的一種穴蛋白HOLIN輔助才能夠穿過宿主細胞膜進入周間質進而作用于宿主細胞壁肽聚糖層。因此對于噬菌體內溶素及穴蛋白進行廣泛深入的研究不但有助于了解噬菌體與宿主的相互作用、揭示生命的多樣性而且將內溶素作為生物制劑應用于噬菌體治療PHAGETHERAPY也有重要的研究意義。材料與方法收集GENBANK中已經登錄的全部銅綠假單胞菌雙鏈DNA噬菌體基因組序列含我室提交的噬菌體PAP2和PAP3基因組序列及我室未提交的噬菌體PAP1部分基因組序列。首先初步分析各基因組組成特點并進行比較基因組分析其次通過對所有基因組可能編碼的F進行BLAST檢索從而推定所有可能的內溶素及穴蛋白基因再次對發現的銅綠假單胞菌噬菌體內溶素及穴蛋白進行比較、歸類、三級結構預測、系統發生進化分析及跨膜結構域預測最后克隆、表達推定的銅綠假單胞菌噬菌體PAPL內溶素基因純化基因表達產物分析這些表達產物對底物肽聚糖的降解活性及抑菌作用通過實驗證實推定的內溶素的生物學功能。結果與討論1銅綠假單胞菌噬菌體基因組比較經過搜集整理共有20種銅綠假單胞菌雙鏈DNA噬菌體基因組序列。除10種銅綠假單胞菌噬菌體基因組已完成了初步注釋外其余銅綠假單胞菌噬菌體基因組僅僅是完成了測序工作未作任何注釋。通過對基因組序列比較分析除這三對噬菌體外其它銅綠假單胞菌噬菌體基因組序列相互之間相似性極低。這三對噬菌體分別是PA7與PA16、119X與PAP2、SD1M與PHHIKZ其中噬菌體PA7與PA16基因組序列之間相似性達99％以上噬菌體119X和PAP2基因組序列之間相似性為93％噬菌體SD1M與PHIKZ基因組序列之間相似性為99％。這些相似性的序列有的表現為大片段完全相同呈嵌合體狀態有的表現為突變堿基呈點狀分散且基因組兩端序列變化顯著。這種結構模式表明噬菌體基因組的進化與其它物種的進化類似分為漸變式和爆發式。其中爆發式進化可以用模塊進化理論MODULAREVOLUTION來解釋基因或蛋白的進化并不是通過連續的一個個的核苷酸或者氨基酸的替換而是通過裝配已經存在的編碼蛋白多肽的核苷酸區段完成的而進化的結果則表現在噬菌體基因組呈鑲嵌型結構且基因組兩端序列變化顯著。2銅綠假單胞菌噬菌體內溶素基因的推定根據銅綠假單胞菌噬菌體在GENBANK登錄的序列及基因注釋已有12種內溶素基因被發現與命名。而我們對20種銅綠假單胞菌噬菌體基因組重新分析新發現8種內溶素基因。這8種噬菌體內溶素基因分別是噬菌體F10的F37273～37890、噬菌體的F8OPF24127～26709及F34978～35637、噬菌體M6的F13111～13932、噬菌體PALL的F21764～22279、噬菌體SD1M的F147382～148161及F190416～197138、噬菌體PAP1的F25043～25603。3銅綠假單胞菌噬菌體內溶素分類對20種噬菌體內溶素基因編碼的氨基酸序列經過CLUSTALW多重序列比對后生成的進化樹結果來看銅綠假單胞菌噬菌體內溶素可以分為4類包括N乙酰胞壁酸酶類、葡萄糖苷酶類、轉糖基酶類和未知功能類。新發現的8種噬菌體內溶素中屬于N乙酰胞壁酸酶類的內溶素只有1種是噬菌體PALL的F21764～22279編碼產物屬于葡萄糖苷酶類的內溶素有2種分別是噬菌體F8的F34978～35637和F10的F37273～37890編碼的產物屬于轉糖基酶類的內溶素有4種分別是噬菌體M6的F13111～13932、噬菌體F8的F24127～26706及噬菌體SD1M的F147382～148161及F190416～197138編碼的產物均而噬菌體PAP1的F25043～25603編碼的產物由于同時與肽鏈內切酶和酰氨酶在N端序列上有一定的相似性目前尚不能歸類本文將之歸為未知功能類。4銅綠假單胞菌噬菌體穴蛋白基因推定在20種噬菌體中已有3種噬菌體編碼穴蛋白的基因被注釋。我們對20種噬菌體基因組重新分析新發現了2種穴蛋白基因分別是噬菌體F10的F36944～37276及噬菌體M6的F12887～13219。5種穴蛋白的基因序列及編碼的氨基酸序列具有共同的基本特征編碼穴蛋白的基因位于內溶素基因的上游通常含有至少兩個疏水區和一段較短的連接序列蛋白質多肽鏈氨基酸殘基個數在71～111之間。此外穴蛋白基因在噬菌體基因組內與內溶素基因均有多個堿基的重疊現象GENESOVERLAP。在其它未發現穴蛋白噬菌體的基因組序列中均能發現一個或幾個編碼含有跨膜區結構的基因這些含有跨膜區結構的基因是否是噬菌體穴蛋白的候選基因值得深入研究。5噬菌體PAP1內溶素基因ELY的克隆、表達與純化本文選擇銅綠假單胞菌噬菌體PAP1內溶素基因進行驗證。通過對PCR反應體系和條件的優化以噬菌體PAP1基因組DNA為模板通過PCR擴增獲得噬菌體PAP1內溶素基因全長序列。將該基因構建到表達載體PQE31中然后轉化大腸埃希菌M15PREP4并誘導表達。在一定范圍內隨IPTG濃度的增加重組蛋白表達率增加至04～06MM時基本達到最高峰值重組蛋白表達最佳誘導時間為6H重組蛋白表達形式主要以可溶性狀態存在。經過NINTA親和柱層析、UNOSPHERES陽離子交換層析及分子篩脫鹽后獲得了與預測分子量大小相符的單一條帶的目標蛋白。6底物的提取與ELY6H重組融合蛋白酶活性檢測7ELY6H重組融合蛋白的抑菌活性檢測結論本研究通過對銅綠假單胞菌噬菌體內溶素的基因推定共發現20種內溶素基因和6種穴蛋白基因其中8種內溶素基因和2種穴蛋白基因為本研究新發現基因。推定的內溶素基因分屬于4個類群轉糖基酶類、N乙酰胞壁酸酶類、N乙酰葡萄糖苷酶類和功能未知類。選擇一推定的噬菌體PAP1ELY基因進行克隆和表達同時對表達的ELY6H重組融合蛋白進行了純化得到較純的重組融合蛋白。對該重組融合蛋白對底物肽聚糖的降解活性檢測及抑菌活性檢測。結果表明推定的噬菌體PAP1重組內溶素融合蛋白對銅綠假單胞菌細胞壁肽聚糖具有降解活性并且對金黃色葡萄球菌活菌具有一定的抑菌活性。該研究從實驗方面證實了推定的噬菌體PAP1內溶素基因的生物學功能。但該基因的工程菌表達產物在醫學抗感染方面可能不具有直接應用意義。

簡介：中國科學技術大學博士學位論文生物醫學超聲中若干非線性問題的研究姓名杜宏偉申請學位級別博士專業生物醫學工程指導教師馮煥清彭虎20070501中國科學技術大學博士學位論文ABSTRACTABSTRACTINTHEORYANDAPPLICATIONOFBIOMEDICALULTRASOUND，THESTUDYOFNONLINEARPHENOMENAISONEOFTHEHIGHLIGHTSANDDIFFICULTIESDURINGTHELASTSEVERALYEARSBETTERRESOLUTIONANDCONTRASTCALLBEOBTAINEDBYEMPLOYINGNONLINEARPRINCIPLESINULTRASONICIMAGINGULTRASOUNDIMAGESWITHHIGHERQUALITYTHENCANBECONSUUCTEDTODESCRIBETHEIMAGINGOBJECTSMORECLEARLYANDTRULYITHASSHOWNUSREMARKABLEADVANTAGESAND勰ATTRACTIVEFUTUREAILRESEARCHWORKINTRODUCEDINTHISTHESISFOLLOWSTHERIGOROUS、FEASIBLEANDEFFECTIVEPRINCIPLE，ANDOFFERSSYSTEMATICTHEORY，MODELING、NUMERICALCOMPUTATIONANDSIMULATIONMETHODSINSOLVINGSOMEIMPORTANTPROBLEMSINTHEPRINCIPLEANDAPPLICATIONOFNONLINEARULTEASOUNDTHERESEARCHACHIEVEMENTSPRESENTEDINTHISDOCTORALDISSERTATIONHASFOLLOWINGFEATURES1ANEWMETHODBASEDONTHEFOURIERBESSELSERIESISPROPOSEDTOCALCULATETHEHIGHERORDERHARMONICCOMPONENTSOFANONLINEARULTRASOUNDFIEIDINABSORBINGMEDIUMANDANANALYTICALSOLUTIONOFASERIESFORMISOBTAINEDACLOSEDANALYTICALSOLUTIONOFTHEHLGHERORDERHARMONICSINTHEZ譬ROTHORDERBESSELULTRASOUNDFIELDANDTHEFOCUSEDGAUSSIANULTRASOUNDFIELDISDEDUCEDTOSTUDYTHEFIELDPROPERTYESPECIALLYTHENEARFIELDPROPERTY2THEFUNDAMENTALANDHIGHERORDERHARMONICULTRASOUNDFIELDSOFAZEROTHORDERBESSELULTRASOUNDFIELDANDFOCUSEDGAUSSIANFIELDINABSORBINGMEDIUMARECOMPUTEDANDSIMULMEDBYSOLVINGTHEKZKEQUATIONUSINGAFREQUENCYDOMAINFINITEDIFFERENCEMETHOD111ECOMPUTATIONANDSIMULATIONRESULTSVERIFIEDTHETHEORETICALCONCLUSION3APRELIMINARYSTUDYOFTHEHARMONICIMAGINGTHEORYANDMODELISINTRODUCED，ANDASIMPLECOMPUTATIONMODELFRAMEISPROPOSEDNIISRESEARCHISSPONSOREDBYTHENATIONALSCIENCEFOUNDATIONOFCHINAPROJECT“STUDYONHIGHRESOLUTIONANDHIGHFRAMERATENLTMSONICIMAGINGSYSTEM”NO60471057ANDTHEYOUTHFOUNDATIONOFTHEUNIVERSITYOFSCIENCEANDTECHNOLOGYOFCHINA‘‘STUDYOFTHEPROPERTYOFNONLINEARNONDIFFRACTIONBEAMANDITSAPPLICATIONINMEDICALULTRASOUND”NOKA2100230001KEYWORDSULTRASOUND；NONLINEARULTRASOUNDFIELD；KZKEQUATION；FOURIERBESSELSERIES；BCSSELULTRASOUNDFIELD；FOCUSEDGAUSSIANULTRASOUNDFIELD；FREQUENCYDOMAINFINITEDIFFERENCEMETHOD；HARMONICIMAGINGH

簡介：慢病毒載體因為可以介導外源基因在非分裂細胞中穩定高效地表達而成為轉基因動物和基因治療研究的重要工具。本實驗以人免疫缺陷病毒HIV1的復制缺陷型載體系統為研究材料該載體系統包括4個質粒由編碼病毒的核心蛋白包括基質蛋白、衣殼蛋白、核衣殼蛋白的基因GAG和編碼病毒復制所需要的酶的基因POL組成的質粒PLP41編碼調節蛋白REV的質粒PLP2編碼水泡性皰疹病毒包膜糖蛋白VSVG的質粒PLPVSVG以及慢病毒基因轉移載體PLENTI6V5DTOPO組成。通過瞬時轉染上述質粒到293FT細胞可以產生復制缺陷型的慢病毒但費時、費力和得到的病毒滴度較低是這種方法的主要缺點。本研究提出了一種全新的包裝慢病毒的方法即借助偽狂犬病毒載體的共感染生產慢病毒載體。首先對慢病毒基因轉移載體進行改造得到了一個可表達綠色熒光蛋白基因的重組基因轉移載體質粒PLENTI6EGFP并將其與3個輔助質粒共轉染得到了表達綠色熒光蛋白的慢病毒。然后將上述四個質粒上的PUC18復制子換成了適用于接合轉移的條件型R6K復制子然后用MAGIC的方法分別將這4個質粒上的元件轉移到BAC化的偽狂犬病毒PRV載體上得到4種重組偽狂犬病毒PRVPLP1、PRVPLP2、PRVPLPVSVG、以及PRVPLENTI6EGFP載體。然后這四種包含慢病毒包裝元件的四種偽狂犬病毒共感染PK15細胞得到表達了帶外源表達GFP基因的重組慢病毒載體。本實驗還結合了大腸桿菌介導的對哺乳動物的基因轉移即用含有4種目的質粒和PGBOINVHLY的大腸桿菌DH10B菌株分別與哺乳動物細胞混合培養包裝偽狂犬病毒。這樣我們獲得重組慢病毒的過程就不需要使用轉染試劑并且省去了質粒的制備大大的降低了慢病毒的生產成本。